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CRISPR-DNA 等溫快速擴(kuò)增凍干球(熒光型)

本試劑盒利用高敏恒溫?cái)U(kuò)增(H-SIA)以及 CRISPR/Cas(基因編輯核酸檢測技術(shù))開 展核酸檢測。 首先對核酸樣本進(jìn)行高敏恒溫?cái)U(kuò)增(H-SIA),然后向擴(kuò)增產(chǎn)物中加入 CRISPR 反應(yīng)體 系并進(jìn)行恒溫反應(yīng)。若反應(yīng)體系中的 crRNA(序列中含有與 Cas 蛋白結(jié)合的回文序列和與目 的基因序列互補(bǔ)的特異序列)識(shí)別到擴(kuò)增產(chǎn)物中的目的基因序列,則激活 Cas 蛋白的切割活 性,剪切反應(yīng)體系中的報(bào)

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  • 規(guī)格參數(shù)
  • 售后服務(wù)

超敏 CRISPR-DNA 等溫快速擴(kuò)增檢測凍干球(試紙條型).png

產(chǎn)品名稱 CRISPR-DNA 等溫快速擴(kuò)增凍干球(熒光型) 


2.原理概述 本試劑盒利用高敏恒溫?cái)U(kuò)增(H-SIA)以及 CRISPR/Cas(基因編輯核酸檢測技術(shù))開 展核酸檢測。 首先對核酸樣本進(jìn)行高敏恒溫?cái)U(kuò)增(H-SIA),然后向擴(kuò)增產(chǎn)物中加入 CRISPR 反應(yīng)體 系并進(jìn)行恒溫反應(yīng)。若反應(yīng)體系中的 crRNA(序列中含有與 Cas 蛋白結(jié)合的回文序列和與目 的基因序列互補(bǔ)的特異序列)識(shí)別到擴(kuò)增產(chǎn)物中的目的基因序列,則激活 Cas 蛋白的切割活 性,剪切反應(yīng)體系中的報(bào)告 RNA,報(bào)告 RNA 被剪切后會(huì)發(fā)出熒光被儀器檢測出熒光信號(hào); 若擴(kuò)增產(chǎn)物不含目的基因序列,則不激活 Cas 蛋白,報(bào)告 RNA 不被剪切,無熒光信號(hào)被采集。

 

3.主要組成成分 

主要成分.png

4.產(chǎn)品特點(diǎn) 

4.1 外觀:試劑盒包裝完整,模板稀釋液無漏液。 

4.2 檢測下限:檢測自建體系性能達(dá)到 100 copy/mL。不同體系檢測性能會(huì)略有差異。 

4.3 重復(fù)性:試劑檢測同一樣本 10 次,結(jié)果均一致。 


5.有效期 

2-8℃避光下有效期為 12 個(gè)月。28±2℃避光保存下有效期為 個(gè)月。 


6.操作步驟 

6.1 準(zhǔn)備模板:采用模板稀釋液按照試驗(yàn)要求稀釋模板。 


6.2 H-SIA 等溫?cái)U(kuò)增:取 1.5 ml 離心管放入 顆 H-SIA 球,加入引物探針,加入 45.5 μl 模 板(終體積為 50ul),輕彈幾次混勻。后 42℃孵育 20 min。 

注:F/R 引物推薦用量:10 μM,各加入 1-2μl; 探針推薦用量:500-1000 ng/T。可根據(jù)要求進(jìn)行調(diào)整。

 

6.3 CRISPR 剪切反應(yīng):將 個(gè) CRISPR 凍干球放入 反應(yīng)管中,加入 45 ul 水溶解,加入 crRNA,加入 5uL 等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物,上下顛倒混勻后離心。后將 聯(lián)排放于熒光定量 PCR 中, 37℃恒溫反應(yīng),30s 采集一次信號(hào)(FAM 通道),設(shè)置 60 個(gè)循環(huán)。 注:crRNA 推薦用量:100-500ng/T。可根據(jù)體系進(jìn)行調(diào)整。 檢測通道可根據(jù)引物探針不同進(jìn)行更改。

 

7.注意事項(xiàng) 

7.1 本試劑用于體外檢測,僅供科研使用,使用前請仔細(xì)閱讀本說明書。 

7.2 本試劑盤應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求儲(chǔ)存,必需在有效期內(nèi)使用。 

7.3 應(yīng)按說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作,請勿混合使用不同批次組分。操作失誤或樣本量過少都有可 能導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。 

7.4 如果試劑盒包裝損壞、有破損、漏氣等,請不要使用該產(chǎn)品。 

7.5 試劑袋中的稀釋液、干燥劑不得吞服。稀釋液中含有少量防腐劑,可能對皮膚和眼睛造 成刺激。如果該溶液接觸到皮膚或眼睛,立即用大量清水沖洗。 如發(fā)生皮膚刺激或皮疹,應(yīng)及時(shí)就診。操作時(shí)應(yīng)注意做好安全防護(hù)措施,使用前后清洗或消毒雙手。


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