目錄號(hào)：N259-YH01-01B

產(chǎn)品描述:

Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一種新興的DNA-蛋白質(zhì)互作研究方法。CUT&Tag以融合了protein A/G的Tn5轉(zhuǎn)座酶為核心，融合蛋白通過(guò)protein A/G與抗體結(jié)合，使得Tn5被栓系在靶位點(diǎn)周?chē)瑥亩谀康奈稽c(diǎn)附近進(jìn)行酶切反應(yīng)，并同時(shí)引入二代測(cè)序所必需的接頭序列，產(chǎn)物DNA經(jīng)過(guò)后續(xù)提取與PCR擴(kuò)增后，得到直接用于測(cè)序的文庫(kù)。CUT&Tag與傳統(tǒng)的ChIP-Seq技術(shù)相比較，實(shí)驗(yàn)不需要超聲打斷，也不需要傳統(tǒng)的連接法添加測(cè)序接頭，操作簡(jiǎn)單、周期短、信噪比高、重復(fù)性好、細(xì)胞用量少，為極低起始細(xì)胞量和單細(xì)胞測(cè)序研究提供了可能性。

NovoNGS? CUT&Tag 3.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina?) 試劑盒包含CUT&Tag實(shí)驗(yàn)中孵育抗體、轉(zhuǎn)座體、構(gòu)建文庫(kù)的相關(guān)試劑，可以用于組蛋白修飾和轉(zhuǎn)錄因子的染色質(zhì)結(jié)合狀態(tài)研究。本試劑盒包含高活性的ChiTagTM  pAG-Tn5，相較于最初版本的pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶，pAG結(jié)構(gòu)域?qū)ν谩⑹蟮榷喾N來(lái)源抗體具有廣譜的強(qiáng)親和性，在實(shí)驗(yàn)抗體的選擇上具有更大的空間。

針對(duì)CUT&Tag打斷產(chǎn)物DNA提取過(guò)程中小片段丟失的問(wèn)題，本試劑盒提供優(yōu)化的Tagment DNA Extract Beads，相較于常規(guī)的片段分選磁珠可以完整的回收CUT&Tag產(chǎn)物中的小片段DNA，大大簡(jiǎn)化了酚氯仿-乙醇沉淀法的繁瑣操作。此外，本試劑盒還提供了陽(yáng)性抗體H3K4me3（兔抗）以及相應(yīng)的二抗（羊抗兔IgG），用于陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)（僅B包裝提供陽(yáng)性抗體）。

產(chǎn)品用途：

DNA-蛋白質(zhì)互作研究。在常見(jiàn)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞上用于替代傳統(tǒng)的ChIP-Seq 技術(shù)，特別適用于細(xì)胞數(shù)量較少的樣本，也可應(yīng)用于經(jīng)過(guò)處理的植物和酵母樣本上。 

基本原理：細(xì)胞被固定在刀豆蛋白磁珠（ConA磁珠）表面，然后加入洋地黃皂苷（digitonin）透化細(xì)胞膜，依次進(jìn)行一抗、二抗、轉(zhuǎn)座體的孵育，隨后加入Mg2+激活轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行片段化反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)過(guò)DNA提取、PCR富集完成二代測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建。對(duì)于人源細(xì)胞常規(guī)的組蛋白修飾，僅需進(jìn)行3-5M reads的測(cè)序量就能得到高分辨率的全基因組圖譜。

產(chǎn)品性能和應(yīng)用實(shí)例：

■ ChiTagTM  pAG-Tn5的酶切活性：

■ 不同細(xì)胞數(shù)量樣本上的CUT&Tag結(jié)果：

■ 不同抗體的CUT&Tag結(jié)果：

■ 不同細(xì)胞系的CUT&Tag結(jié)果：

轉(zhuǎn)座體單鏈接頭序列：

Adaptor1: 5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’

Adaptor2: 5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’

ME: 5’-pCTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3’

轉(zhuǎn)座體單鏈接頭序列：

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-Index1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’，其中-xxxxxxxxx-為插入序列,兩端為文庫(kù)結(jié)構(gòu)。

參考文獻(xiàn)：

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The chromatin accessibility landscape reveals distinct transcriptional regulation in the induction of human primordial germ cell-like cells from pluripotent stem cells[J]. Xiaoman Wang et al. Stem Cell Reports. 2021.

Cellular senescence in hepatocellular carcinoma induced by a long non-coding RNA-encoded peptide PINT87aa by blocking FOXM1-mediated PHB2[J]. Xiaohong Xiang et al. Theranostics. 2021.

Gastrin, via Activation of PPARα, Protects the Kidney Against Hypertensive Injury[J]. Daqian Gu et al. Clinical Science. 2021.

Alpha‐fetoprotein accelerates the progression of hepatocellular carcinoma by promoting Bcl‐2 gene expression through an RA‐RAR signalling pathway[J]. Chao Zhang et al. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2020.

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