mRNA疫苗體外合成解決方案

新冠mRNA疫苗制備流程：

1、mRNA體外轉(zhuǎn)錄  相關(guān)產(chǎn)品：T7 RNA Polymerase (貨號(hào)：E121)

高度特異識(shí)別T7啟動(dòng)子

單次反應(yīng)RNA產(chǎn)量可達(dá)100μg（模板僅需100ng）

可對(duì)低至1ng模板進(jìn)行有效轉(zhuǎn)錄

Qubit數(shù)據(jù)顯示，Novoprotein試劑盒20ul轉(zhuǎn)錄體系產(chǎn)物磁珠純化后產(chǎn)量在100-150ug。

Qsep1結(jié)果顯示，體外轉(zhuǎn)錄得到的RNA完整性很好。

2、mRNA轉(zhuǎn)錄后修飾：加帽加尾

2.1、mRNA加帽(Cap0)   相關(guān)產(chǎn)品：Vaccinia Capping system (貨號(hào)：M062)        

高效完成mRNA加帽過程       

提高mRNA的穩(wěn)定性，防止被RNA酶降解                                                           

提高mRNA的翻譯效率

2.2、mRNA加帽(Cap1)  相關(guān)產(chǎn)品：mRNA 2’-O甲基轉(zhuǎn)移酶 (貨號(hào)：M072)

高效完成RNA 5′ 末端緊鄰帽結(jié)構(gòu)的第一個(gè)核苷酸的甲基化      

使帶帽 Cap 0甲基化為 Cap 1

提高 RNA 的翻譯效率

改善 mRNA 顯微注射和轉(zhuǎn)染后的表達(dá)

降低免疫原性

Cap1更不容易被機(jī)體免疫系統(tǒng)的RNA感受器識(shí)別，因此免疫刺激更低

2.3、mRNA加尾(PolyA)  相關(guān)產(chǎn)品： E. coli Poly(A) Polymerase (貨號(hào)：M012)

穩(wěn)定mRNA的存在形式

引導(dǎo)轉(zhuǎn)錄終止

提高RNA在真核細(xì)胞中的翻譯效率

左邊novoprotein，右邊某品牌A

酶加量 1：0U；2：5U；3：1U；4：0.2U；5：0.04U；6：0.008U

3、其他輔助產(chǎn)品  

3.1、防止mRNA降解 相關(guān)產(chǎn)品：RNase抑制劑 (貨號(hào)：E125)

與RNase  A形成1：1復(fù)合體，對(duì)RNase 表現(xiàn)高度的非競爭性抑制，保護(hù)mRNA轉(zhuǎn)錄后不被降解

65℃保溫10min，40U酶活可保留一半以上，凍融10次酶活基本不受影響

3.2、降解模板DNA  相關(guān)產(chǎn)品：DNase I (貨號(hào)：E127)

可以將單鏈或雙鏈DNA同等程度進(jìn)行隨機(jī)分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸。

mRNA轉(zhuǎn)錄結(jié)束后，消化模板DNA

同對(duì)照相比均能很好的去除RNA樣本中DNA殘留

3.3、增加mRNA產(chǎn)量  相關(guān)產(chǎn)品：無機(jī)焦磷酸酶 (貨號(hào)：M036)

相關(guān)產(chǎn)品